74134RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen试剂盒

2023-12-24

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RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen试剂盒RNeasy Plus Mini Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA敏感的下游应用,如定量real-time RT-PCR。纯化得到的RNA还可以用于其他应用。

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RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen试剂盒

原理细胞和易裂解组织首先在含有异硫*酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化,该缓冲液能使RNases立即失活,以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用,可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件,样本再加入到RNeasy Mini离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

RNeasy Plus Mini Kit (50)qiagen试剂盒

操作流程可从多达107个细胞或30 mg组织中纯化总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA(参见RNeasy Plus procedure )。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱,在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇,样本再加上样到RNeasy Mini离心柱。RNA结合到膜上,污染物被洗去。获得高品质RNA,洗脱体积30 ?l或更大。处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。此操作流程适合富集mRNA,不包括大部分小于200 nt的RNAs(如rRNAs和tRNAs)。RNeasy Plus操作流程稍作修改后可从培养细胞中纯化含miRNA等小RNAs的总RNA。使用Buffer RLT Plus(RNeasy Plus Mini Kit提供)进行组织破碎和匀质化时,可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX(单独提供)可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测,表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

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